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高效液相色谱仪测定水产品中孔雀石绿

发布于 2011-09-05阅读(2536)来源 admin

摘要

虽然MG已被列为水产养殖禁用药物,但因为其价格低廉,同时目前在水霉病防治上尚无其它有效药品,因此仍有一些水产养殖户在普遍使用。

内容

 

孔雀石绿(MG)为三苯甲烷类工业染料, 在水产养殖上可以有效的预防与治疗各类水产动物的水霉病、鳃霉病和小虫病。并常用于鱼苗的消毒。但一些水产品贩运商为保持水产品新鲜度普遍用MG消毒车厢和活鱼池;酒店为了延长鱼的存活时间也在鱼池中投放MG进行消毒。使用MG消毒后的鱼即使死亡后颜色也较为鲜亮,消费者很难从外表进行辨认。MG在水生生物体中的主要代谢产物为无色孔雀石绿(LMG)。MG具有毒性强、高残留和致畸、致癌、致突变等副作用。LMG由于不溶于水,其残留毒性比MG更强。所以,目前世界上诸如美国、日本、加拿大和欧盟等许多国家已将MG列为水产养殖禁用药物,我国也于2002年5月将其列入“食品动物禁用的兽药及其化合物清单”(1)。虽然MG已被列为水产养殖禁用药物,但因为其价格低廉,同时目前在水霉病防治上尚无其它有效药品,因此仍有一些水产养殖户在普遍使用。

   各类水产品中MG和LMG的检测是我国食品卫生学面临的新课题。为此,我国农业部2004年颁布了水产品中MG残留量测定的行业标准检验法-液相色谱法(SC/T3021-2004)(2);国家质量监督检疫总局和国家标准化管理委员会于2005年亦发布了“液相色谱-串联质谱法”和“高效液相色谱法”((GB/T19857-2005)(3)的标准检验法。Chang-Jun Cha等报道了(2001)采用氰基柱的反相高效液相色谱法和液质联机检测MG(4)。


在上述分析方法中,SC/T3021-2004采用C18柱,等梯度洗脱方式,但需要较大流速(2ml/min);而 GB/T19857-2005法采用C18柱,梯度洗脱方式。文献(4)采用氰基柱分离的梯度洗脱方式。我们在研究这些分析方法的基础上,采用氰基柱分离、流速为1.0mL/min的等梯度洗脱方式,具有保留时间短、分离效果好、分析速度快、节省试剂;最低检测浓度无LMG为0.02μg/mL,MG为0.05μg/mL。精密度高;特别是线性范围达0.1μg/mL~160.0μg/mL,远远大于 SC/T3021-2004线性范围(MG 0.01μg/m L~0.4μg/mL;LMG0.02μg/mL~0.40μg/mL)。而且,等梯度洗脱方式又扩大了液相色谱的应用范围。现将结果报告如下:


1.      材料与方法
1.     1材料
1.1.1试剂
    乙睛 色谱纯,fishte ;
    乙酸铵 ,hplc纯 ,DIKMA;
    孔雀石绿(MG) sigma试剂;
    无色孔雀石绿(LMG)  sigma试剂。
0.125mol/L乙酸铵溶液  称取乙酸铵9.64 g,用纯水溶解并定容至1000mL。用0.45μm滤膜过滤。
MG标准储备液  准确称取孔雀石绿0.100 0g,用乙睛溶解并定容至100 mL。该标准溶液浓度为1mg/mL。避光、冰箱冷冻层保存。     
MG标准应用液 吸取1mg/mL孔雀石绿标准储备液用乙睛稀释至1.0μg/mL。
LMG标准储备液 准确称取孔雀石绿0.100 0g,用乙睛溶解并定容至100mL。该标准溶液浓度为1mg/mL。
    LMG标准应用液  吸取1mg/mL无色孔雀石绿标准储备液用乙睛稀释至1.0μg/mL。
MG和LMG标准混合溶液  分别吸取MG和LMG标准储备液,用乙睛稀释成不同浓度的标准混合溶液。
1.1.2 仪器
  高效液相色谱仪。
1.2 步骤
1.2.1 色谱条件
   检测器  紫外-可见光检测器,波长618nm;
   色谱柱  氰基柱,4.6mm×250mm,5μm;
   流动相  乙睛-0.125mol/L乙酸铵(pH4.5)=(47+53);
   柱温  35℃;
   进样量  20μL。

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